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11-25
摘要:無內(nèi)源質(zhì)粒短乳桿菌在食品、醫(yī)藥等諸多領(lǐng)域展現(xiàn)出潛在應(yīng)用價(jià)值,然而其高效電轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建面臨挑戰(zhàn)。本研究聚焦于探索該菌株電轉(zhuǎn)化的適配條件,通過系統(tǒng)優(yōu)化電擊參數(shù)(電壓、電容、電阻)、細(xì)胞預(yù)處理方式(生長階段、甘氨酸濃度、溶菌酶處理時(shí)長)以及轉(zhuǎn)化介質(zhì)成分(PEG濃度、Mg2?濃度、質(zhì)粒濃度),成功建立起穩(wěn)定且高效的電轉(zhuǎn)化方法。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,在優(yōu)化條件下,無內(nèi)源質(zhì)粒短乳桿菌的電轉(zhuǎn)化效率顯著提升,為其作為基因工程宿主菌用于功能基因表達(dá)、代謝工程改造等奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),也為乳酸菌電轉(zhuǎn)化研...
11-22
一、引言隨著基因治療、基因編輯以及轉(zhuǎn)基因技術(shù)的迅猛發(fā)展,將外源基因有效地導(dǎo)入目標(biāo)細(xì)胞并準(zhǔn)確評估其轉(zhuǎn)移效率成為眾多研究領(lǐng)域的核心任務(wù)之一。基因轉(zhuǎn)移效率不僅直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性,更是決定這些技術(shù)能否成功應(yīng)用于臨床治療的關(guān)鍵因素。傳統(tǒng)的基因轉(zhuǎn)移效率檢測方法,如熒光定量PCR(qPCR)、蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)等,雖然在一定程度上能夠反映基因的轉(zhuǎn)移情況,但各自存在局限性。qPCR主要檢測基因的轉(zhuǎn)錄水平,無法直接反映基因在細(xì)胞水平的表達(dá)和功能狀態(tài);West...
11-22
一、引言隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的飛速發(fā)展,基因轉(zhuǎn)染技術(shù)已成為研究基因功能、疾病發(fā)病機(jī)制以及基因治療等領(lǐng)域的核心手段之一。真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染是將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞內(nèi)并使其穩(wěn)定表達(dá)的過程,這一過程面臨著諸多挑戰(zhàn),如外源基因的有效遞送、細(xì)胞毒性的控制以及轉(zhuǎn)染效率的提高等。陽離子脂質(zhì)體作為一種非病毒基因載體,因其具有良好的生物相容性、可修飾性以及相對較低的免疫原性等優(yōu)點(diǎn),受到了廣泛關(guān)注。其基本原理是利用陽離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電荷的核酸分子通過靜電作用形成復(fù)合物,然后通過脂質(zhì)體與細(xì)胞膜的融合或內(nèi)...
11-22
一、引言煙草(Nicotianatabacum)作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物和模式植物,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和植物科學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。基因工程技術(shù)為煙草的遺傳改良提供了強(qiáng)大的手段,其中花粉介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化具有更好的優(yōu)勢,如能夠避免體細(xì)胞變異、可直接獲得轉(zhuǎn)基因配子等。脫外壁花粉由于去除了外壁的物理屏障,理論上更有利于外源基因的導(dǎo)入。基因槍法作為一種常用的遺傳轉(zhuǎn)化方法,已在多種植物材料的轉(zhuǎn)化中取得成功。然而,關(guān)于基因槍法介導(dǎo)GUS基因轉(zhuǎn)入煙草脫外壁花粉的研究報(bào)道相對較少。因此,本研究開展相關(guān)...
11-22
一、引言亞麻(LinumusitatissimumL.)作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物,在紡織、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的迅速發(fā)展,轉(zhuǎn)基因技術(shù)為亞麻的遺傳改良提供了新的途徑。傳統(tǒng)的亞麻轉(zhuǎn)基因方法往往面臨著再生效率低、轉(zhuǎn)化周期長等諸多問題。而直接分化再生系統(tǒng)具有再生過程相對簡單、快速的優(yōu)勢,能夠有效提高轉(zhuǎn)基因效率,因此本研究旨在應(yīng)用直接分化再生系統(tǒng)深入開展亞麻轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究,為亞麻的品種改良和功能基因組學(xué)研究奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。二、材料與方法(一)植物材料選用當(dāng)?shù)?..
11-22
一、引言大豆(Glycinemax(L.)Merr.)作為全球重要的糧食作物和經(jīng)濟(jì)作物,在油脂、蛋白質(zhì)生產(chǎn)以及動物飼料等方面具有廣泛應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展,通過遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)對大豆進(jìn)行遺傳改良已成為提高大豆產(chǎn)量、品質(zhì)以及增強(qiáng)其抗逆性的重要手段。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化是目前應(yīng)用較為廣泛且有效的大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法之一,其具有轉(zhuǎn)化效率相對較高、可導(dǎo)入較大片段外源DNA且遺傳穩(wěn)定性較好等優(yōu)點(diǎn)。然而,該方法仍存在一些技術(shù)瓶頸,如轉(zhuǎn)化效率受多種因素制約、不同大豆品種之間轉(zhuǎn)化效率差異較大等...
11-21
一、引言環(huán)境微生物在地球生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)、能量轉(zhuǎn)化和生態(tài)平衡維持中起著至關(guān)重要的作用。它們參與了土壤肥力的形成、水體自凈過程、大氣成分的調(diào)節(jié)以及生物地球化學(xué)循環(huán)等眾多關(guān)鍵生態(tài)過程。然而,環(huán)境微生物具有高度的多樣性和復(fù)雜性,其種類繁多、豐度差異大且分布廣泛,傳統(tǒng)的微生物研究方法在解析環(huán)境微生物群落組成、功能和動態(tài)變化方面存在一定的局限性。核酸雜交技術(shù)作為一種分子生物學(xué)手段,能夠基于核酸分子的互補(bǔ)配對原理,特異性地檢測和分析環(huán)境樣品中的微生物核酸序列,從而為深入了解環(huán)境微生物的...
11-21
一、引言家蠶在蠶業(yè)生產(chǎn)中占據(jù)著極為重要的地位,其生長發(fā)育狀況直接影響蠶繭的產(chǎn)量和質(zhì)量。家蠶微孢子蟲病是一種全球性的蠶病,具有傳染性強(qiáng)、難以防治的特點(diǎn)。感染家蠶微孢子蟲的家蠶會出現(xiàn)生長發(fā)育遲緩、食欲不振、蠶體瘦小、吐絲量減少甚至不吐絲等癥狀,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致蠶群大量死亡,給蠶業(yè)經(jīng)濟(jì)帶來巨大損失。傳統(tǒng)的家蠶微孢子蟲檢測方法主要包括顯微鏡觀察法、血清學(xué)檢測法等。顯微鏡觀察法雖然直觀,但需要專業(yè)的操作人員,且對于低濃度的孢子檢測準(zhǔn)確性較差,容易出現(xiàn)漏檢情況。血清學(xué)檢測法如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)...