細胞電穿孔儀的核心原理基于電穿孔現(xiàn)象。細胞膜是一種具有選擇透過性的生物膜，它由磷脂雙分子層構(gòu)成，能夠嚴格控制物質(zhì)進出細胞，維持細胞內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定。當細胞處于電場中時，細胞膜會受到電場力的作用。在正常情況下，細胞膜具有一定的電阻和電容特性，對電場有一定的阻擋作用。然而，當施加的電場強度達到一定閾值時，細胞膜的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)會發(fā)生局部的重新排列，形成短暫的、可逆的微孔，這就是電穿孔現(xiàn)象。這些微孔的大小和數(shù)量取決于電場的強度、脈沖持續(xù)時間、脈沖次數(shù)以及細胞類型等因素。
 

　　細胞電穿孔儀通過準確控制電場的各項參數(shù)來實現(xiàn)對電穿孔過程的調(diào)控。主要的電場參數(shù)包括電場強度、脈沖寬度、脈沖形狀和脈沖次數(shù)等。電場強度是指單位距離上的電勢差，它決定了對細胞膜施加的作用力大小。一般來說，較高的電場強度能夠更容易地誘導細胞膜產(chǎn)生電穿孔，但過高的電場強度可能會導致細胞不可逆的損傷甚至死亡。脈沖寬度是指電脈沖的持續(xù)時間，較長的脈沖寬度可以使細胞膜有足夠的時間形成微孔，但也可能增加細胞受損的風險。脈沖形狀有多種類型，如方波、指數(shù)衰減波等，不同的脈沖形狀對細胞膜的作用方式也有所不同。脈沖次數(shù)則影響著電穿孔的效果和細胞的存活率，多次脈沖可以在一定程度上提高外源物質(zhì)進入細胞的效率，但也會增加細胞的應激反應。
 

　　細胞電穿孔儀的操作流程：
 

　　細胞準備：選擇合適的細胞類型，并進行培養(yǎng)和擴增。在電穿孔前，將細胞收集起來，用適當?shù)木彌_液洗滌，以去除培養(yǎng)基中的血清和其他雜質(zhì)，然后將細胞懸浮在電穿孔緩沖液中，調(diào)整細胞濃度至適宜范圍。
 

　　外源物質(zhì)準備：根據(jù)實驗目的，準備含有外源物質(zhì)(如DNA、RNA、蛋白質(zhì)等)的溶液。外源物質(zhì)的濃度和純度對電穿孔效果有重要影響，需要進行優(yōu)化和純化處理。
 

　　電擊杯準備：選擇合適規(guī)格的電擊杯，并進行清洗和消毒處理。將電擊杯安裝在電穿孔儀上，并預熱或預冷至適宜溫度。
 

　　混合細胞和外源物質(zhì)：將準備好的細胞懸浮液和外源物質(zhì)溶液輕輕混合，避免產(chǎn)生氣泡。然后將混合液轉(zhuǎn)移至電擊杯中。
 

　　電穿孔操作：設(shè)置好電場參數(shù)(如電場強度、脈沖寬度、脈沖次數(shù)等)，啟動電穿孔儀進行電擊。電擊過程中要注意觀察電穿孔儀的顯示界面，確保電脈沖正常產(chǎn)生。
 

　　細胞恢復與培養(yǎng)：電擊完成后，將電擊杯中的細胞迅速轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在適宜的溫度和二氧化碳濃度下進行培養(yǎng)，讓細胞恢復和表達外源物質(zhì)。